目录
宏蛋白组学是个非常小众的领域,即使从事的学者也并非专门做这个,大多是作为系统生物学的延伸研究。业界有几个比较有影响力的研究团队,一是比利时根特大学的Computational Omics and Systems Biology Group
(COMPOMICS) 团队,开发了有代表性的宏蛋白分析工具如Unipept、MetaProteomeAnalyzer (MPA),此外还有很多常规蛋白组的工具,如SearchGUI、PeptideShaker、Thermo Raw File Parser 等,后面如果有机会再介绍。二是加拿大渥太华大学的Daniel Figeys团队,专注于研究人类、小鼠肠道宏蛋白组,一开始提出了经典的迭代搜库三步法(MetaPro-IQ),后面陆续也实现了一些工具,开发了从MetaPro-IQ,到MetaLab,最后到iMetaLab平台的技术路线。
Daniel Figeys介绍:https://med.uottawa.ca/bmi/people/figeys-daniel
iMetaLab有云服务器版本和桌面版本,用来分析宏蛋白数据,下游可视化绘图等分析提供了Shiny Apps,并且也有相应的Demo报告和Wiki。内容主要包括了:肽段和蛋白的鉴定及定量,物种和功能分析,数据分析及其可视化。
关于收费,对于学术研究是免费的,商业用途则需要获得许可。
从内置工具和模块可以看出,这个平台主要处理的是DDA数据,最后得到的蛋白鉴定和定量结果就是MaxQuant产出格式的。
iMetaLab分析完成后生成网页报告https://shiny.imetalab.ca/metalab_report/。
对于报告结果,主要有以下五方面内容:
ID Summary:谱图肽段ID统计
Peptides Summary:肽段鉴定结果分析
ProteinGroups Summary:蛋白鉴定结果分析
Taxon Summary:物种注释结果分析
Function Summary:功能注释结果分析
此外,还有一个MetaMep for Taxon Vis模块,主要是利用MetaMap软件对物种分析结果进行可视化展示和可交互式操作。
分析点包括了报告介绍,项目信息,谱图解析率,肽段鉴定数,汇总统计表。
MSMS ID Rate
这是数据质控的一个指标,可以判断 MS run
的质量,即在1%FDR条件下谱图鉴定为肽段,QE系列仪器一般能达到50%。可以判断组内重复性,以及仪器是否需要清洗,数据是否可利用等。
展示方式:分组散点图,密度图,箱形图。
Peptide Sequence
同样也是统计各样本的肽段鉴定数目分布。
可视化:分组散点图,密度图,箱形图。
上图红框内的分析,包括对肽段鉴定各方面的统计绘图,多变量统计和方差检验,到得到整洁的肽段数据。
肽段结果分析及其可视化:价态分布,长度分布,得分分布,肽段强度分布(离散和累积),各样本肽段强度箱形图,全部样本肽段的聚类热图,肽段层次PCA(2D/3D),各组间方差分析。
最后得到的过滤后的肽段表格(MaxQuant结果)是去除了来自反库和污染库的肽段,他们用的强度值是LFQ和自带的Intensity,整洁肽段表可用于后续分析,也可用作者的shiny.imetalab.ca。
蛋白组层次和肽段层次的分析基本是一样的。多了一个unique peptide分布。
疑问:为什么都用方差分析?难道更多的情况不是两组吗,即便是多组,很多客户也是要求两两比较。
最后得到的也是过滤后的蛋白表格。
疑问:一般蛋白/基因注释KEGG是到KO层级,这里都是转化到了Pathway层面,一条Pathway中多个蛋白分子强度不知他们是怎么处理的,之前我是进行加和处理的。
最后一个工具是对物种分析进行可视化,可交互是它的优点,而且有多种展示方式。你如果用过MEGAN的话,就知道这些展示方式也都有。当然Unipept也可实现,它这个就是嵌套了Unipept。
手机扫一扫
移动阅读更方便
你可能感兴趣的文章